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ELISA实验时需要注意避光反应主要是看显色所用的底物，OPD的话要避光，因为这种底物受光照后会自行变色，如果用TMB底物的话，就没这么严格了，其他的步骤中像抗原绑定、洗涤之类也都不用避光，只有在做完二抗洗涤完上酶显色底物的时候，因为大部分的底物对光敏感的，见光会分解，所以要求避光操作。当显色完成后（显色时间是比较短的，需要预先摸索好）加入显色终止液后溶液颜色会在几个礼拜之内保持稳定，也不用再避光了。

其他反应步骤加盖封板膜的作用不是避光，而是防止反应过程中有异物落入板孔，从而对检测结果造成影响，同时加盖封板膜还能减少液体的蒸发，保持反应体系的均衡，保证检测结果的准确性。